Q1: 为何实际检测到的WB条带与预期的有所区别？
A1: WB是根据蛋白质的大小来分离蛋白的，通常小分子量蛋白在凝胶中的迁移速度要快。但是迁移率也是受到其他因素影响的，这就造成了实际检测到的条带与预期条带的不一致。主要有以下几种常见因素：
1)翻译后修饰—比如磷酸化、糖基化等，这些修饰会增加蛋白质的分子量。
2)翻译后剪切—比如很多蛋白是以前体蛋白的形式合成的，在执行功能时需要进行剪切成活化的形式，如pro-caspase。
3)不同剪切体—有些来源于同一基因的蛋白有不同的剪切方式，每个剪切方式得到的蛋白大小都是不同的。
4)相对电荷（Relative charge）—氨基酸的组成（charged vs non-charged）。
5)多聚体－如二聚体或三聚体。这些多聚体的形式通常会抵制WB时所做的还原条件，因此造成检测的条带偏大。
Q2: 如何分装抗体？
A2: 分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
请根据一次实验的用量来分装抗体，但是每份不应该少于10ul。分装的体积越小，抗体浓度受蒸发和管壁吸附的影响越大。
Q3: 如何保存抗体？
A3: 收到抗体后，请务必在4℃，12000rpm，离心3到5分钟，（无论是液体还是冻干粉状态），再打开管盖进行分装和保存。
抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融。反复冻融会导致抗体空间结构变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力。抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果。如果抗体保存得当，抗体活性大部分都可以维持数年。
我们坚持推荐您按照说明书上的储存方式来保存抗体。
Q4: 如何确定某个抗体是否能用于未经验证的种属？
A4: 我们不能保证某个抗体能够成功的用于未经我们验证的种属，即使其序列同源性很高。因为一个抗体能否用于检测其他种属的影响因素是非常多的。
如果没有其他的选择，您需要考虑购买抗体用于未经检测的种属时，推荐您先确定下该抗体所用免疫原与您要检测蛋白的序列同源性。您可以通过说明书中“Swiss-Prot”来检测，也可以通过其他网站来查找。将说明书中的抗体免疫原序列和您要检测蛋白的序列输入后比较相同性。如果相同性超过85％，则该抗体能成功检测您要测蛋白的可能性会比较高；但是，即使序列相同性超过85％，我们也不能保证该抗体一定能成功用于您的实验。
Q5: 抗体是否能用于其他种属/实验方法？
A5: 关于某个抗体所有经过检测的种属和用途都标明在说明书上，并且会根据最新验证情况及时得到更新。
如果您希望购买某个产品用于未经验证的种属或者用途，我们鼓励您使用并将实验结果（不论是阳性还是阴性的结果）告知我们（marketing@excellbio.com或者021-33676611-279），这些结果会对其他的客户起到参考的作用。对于每个反馈，我们会提供相应的奖励。
Q6: 二抗选择要点
A6: 二抗选择主要考虑两个方面：
1)种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
Q7: 如何选择合适的一抗？、
A7: 我们推荐一抗选择要点：
1)确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。
2)确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
3)确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
4)样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。
5)单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）；您需要根据实际需要进行选择。
ExCell Bio网站所有说明书都是根据验证情况实时更新的，所以可放心参考！
Q8：什么是磷酸化抗体？
A8：磷酸化抗体是一类特异性识别目标蛋白质磷酸化状态抗体的统称。蛋白质磷酸化指由蛋白质激酶催化的把ATP或GTPγ位的磷酸基团转移到底物蛋白质氨基酸残基上的过程，是生物体内一种常见的调节方式。一些分子在磷酸化状态才具有生物活性或失去活性，这在细胞信号转导的过程中起重要作用。正因为，蛋白质的磷酸化是重要的细胞信号传递环节，所以磷酸化蛋白抗体就成为研究蛋白的磷酸化与信号传递的重要工具。
