SBI 新品Exo-Check™ exosome antibody arrays
【SBI】 新品发布：Exo-Check™ exosome antibody arrays
半定量法快速检测8种已知exosome marker
√ 产品介绍
Exo-Check antibody array预印制了12个检测点，包括8种已知的exosome marker (CD63, CD81, ALIX, FLOT1, ICAM1, EpCam, ANXA5 和 TSG101)，1个GM130 cis-Golgi marker用于检测提取到的exosome产物中的细胞污染。这一试剂盒可用于超速离心法和ExoQuick法抽提的exosome。阳性对照点为预印制的人血清exosome蛋白。待检测exosome裂解后，与Exo-Check共同孵育以让预印制在膜上的抗体能够捕获相应的exosome蛋白。Exo-Check上的GM130抗体检测点能够帮助检测exosome产物中的细胞污染。此试剂盒中也配备了HRP标记的相应二抗。
Exo-Check antibody array能够从一系列样本中半定量特定的exosome 蛋白marker。Exo-Check antibody array在左上角有一个缺口，以判断膜的正确使用方向。
√ 购买信息
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货号
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规格
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产品
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目录价格
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EXORAY-4
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4 Arrays
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Exo-Check Exosome Antibody Array
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询价
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EXORAY-8
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8 Arrays
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询价
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EXORAY-12
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12 Arrays
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询价
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√ 参考产品应用实例
阳性对照检测点应该能够得到明显深色信号，证明检测试剂与操作正确。
根据样本不同，其他exosome marker检测点的信号强弱各不相同。
空白对照检测点应当显示无信号，并作为背景对照。
GM130检测点显示样本中的细胞污染（如果存在）。
以下参考数据使用样本为：使用ExoQuick-TC提取人HT1080肺肉瘤细胞系培养基中的exosome ，300ug exosome蛋白。
√相关 Exosome marker信息
以下表格为Exo-Check™ exosome antibody array所涉及到的exosome marker信息。
√试剂盒组分
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Exo-Check Exosome Antibody Arrays
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Antibody Membrane Array (PVDF membrane) – 4, 8 or 12 array
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membranes
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Exosome Lysis buffer
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Exosome Array Binding buffer
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Array Wash buffer
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Detection buffer (HRP-conjugated secondary mixture)
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Disposable blue forceps to handle membrane arrays
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*试剂盒中不包括HRP显色液，推荐选择THERMO catalog# 34095 SuperSignal West Femto Chemi-luminescent Substrate
√实验步骤：
样本准备与抗体整列捕获
1. 使用ExoQuick或ExoQuick-TC从血清或细胞培养上清中抽提exosome（可兼容超速离心抽提得到的exosome产物）。建议：ExoQuick 处理500ul 血清样本，300ul PBS重悬exosome沉淀；ExoQuick处理10mL培养上清，300ul PBS重悬exosome沉淀。
2. 使用少量exosome重悬液进行蛋白定量，以鉴定exosome产量。
3. 取300-500ug exosome蛋白，加入600ul Exosome Lysis buffer。
4. 涡旋15秒，以获得exosome蛋白裂解液。
5. 取洁净15mL离心管，加入600 ul exosome蛋白裂解液，再加入9.4 mL Exosome Array Binding buffer，上下颠倒三次以混匀。
6. 取洁净的小托盘，用5 mL蒸馏水直接浸润antibody array，室温2分钟。
7. 轻轻弃去膜上的蒸馏水，将10 ml Exosome lysate / binding混合液加至Exo-Check antibody membrane array （使膜的切角处于左手上方方向保证保膜放置正确）。
8. 置于摇床，2-8℃孵育过夜。
Antibody array漂洗与信号检测
1. 轻轻弃去膜上的混合液。
2. 加入10 mL Array wash buffer（需将20X stock稀释成1 X），室温摇床柔和地洗5分钟。
3. 弃去Array wash buffer。
4. 在膜上加入10 mL Detection buffer，室温摇床柔和地洗2小时。
5. 提前5分钟准备显色液（需要自备）；然后将1 mL solution A 与1 mL solution B混合。建议使用THERMO catalog# 34095 SuperSignal West Femto Chemi-luminescent Substrate。
6. 弃去显色液。
7. 将2mL第5步制备的显色液直接加至膜上，并完全覆盖。
8. 室温孵育2分钟；
9. 轻轻弃去显色液，检测信号。
A. 若使用Bio-Rad ChemiDoc XRS Imager System（或类似系统），曝光4-10秒。
B.若使用dak XR film，则曝光1-3分钟后，使用胶片显影机获得结果。
√运输与保存：
Exo-Check试剂盒组为蓝冰运输，且需要保存于4℃。正确保存的Exo-Check试剂盒效期为自收到之日起6个月。
