SBI 新品Exo-Glow™ 试剂盒——荧光标记实时追踪exosome运输！
红色荧光标记內源exosome RNAs
绿色荧光标记内部exosome 蛋白
√ 产品介绍
Exosome是由多种细胞在体内或体外分泌的60-180nm的膜性小囊泡。根据分泌的细胞类型不同，exosome中所含有RNAs和蛋白成分也不相同。因此，exosome为疾病生物标记物的发现和功能特性研究提供了很好的生物学材料。
这些纳米级”小卡车” exosome将信号RNAs和蛋白从一个细胞运输到其他细胞。SBI新产品Exo-Glow™试剂盒，则使得研究者们能够荧光标记內源的exosome RNAs为红色，标记内部exosome蛋白为为绿色，从而达到使用荧光显微镜实时追踪exosome细胞内相互作用和物质运输！
√ 产品原理
Exo-Red染色原理基于Acridine Orange (AO, 吖啶橙)化合物，AO可以透过胞膜，荧光标记exosome内部的单链RNAs。通过荧光显微镜可以观察红色荧光标记的exoRNAs运输到靶细胞。
Exo-Green染色原理基于Carboxyfluorescein succinimidyl diacetate ester (CFSE, 羧基荧光素乙酰乙酸)化合物 ，CFSE也可以透过胞膜。CFSE进入exosome后，被exosome内部的酯酶水解消化二乙酸残基(Savina A., et al., 2002)。激活的CFSE发出绿色荧光，并耦合到蛋白氨基末端。通过荧光显微镜可以观察绿色荧光标记的exoProtein转运到靶细胞。
√ 购买信息
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货号
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规格
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产品
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描述
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EXOR100A-1
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20 rxns
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Exo-Red exosome RNA fluorescent label
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exosome RNA 红色荧光标记产品
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EXOG200A-1
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20 rxns
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Exo-Green exosome protein fluorescent label
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exosome 蛋白 绿色荧光标记产品
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EXOC300A-1
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10 rxns each
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Exo-Red + Exo-Green exosome cargofluorescent label Combo
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exosome RNA红色荧光标记和蛋白绿色荧光标记产品组合
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√ 实验步骤
标记exosome
1. 在1.5mL EP管中用500 ul 1x PBS重悬富集到的exosome；在重悬的exosome中加入50 ul 10x Exo-Red 或者Exo-Green；
2. 轻弹管壁或上下颠倒以混匀； 注意不可涡旋；
3. 混合物在37℃ 孵育10分钟（无需rotation）
4. 加入100 ul ExoQuick-TC 试剂以终止标记反应，上下颠倒6次以混匀；
5. 将混合物置于冰上（或4℃）30分钟；
6. 14000rpm离心3分钟；
7. 弃去上清液，500 ul 1x PBS重悬标记好的exosome，待用。
Exo-Glow标记的exosomes加入靶细胞
1. 6孔板每孔约1x10^5个细胞；加入100 ul 标记好的exosome；（可根据实验需要调整）
2. 培养2-24小时后，按照以下参数使用荧光显微镜观察：
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Exosome Label
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Excitation
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Emission
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Filter setting
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Exo-Red
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460 nm
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650 nm (red)
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Typical RFP filter set
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Exo-Green
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494 nm
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521 nm (green)
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Typical GFP filter set
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√ 产品应用实例
使用Exo-Red 或者 Exo-Green标记人exosome，然后将荧光标记的exosome加入体外培养的靶细胞HEK293，并在一定时间后观察：
Exo-Red标记exosome（2天后）：追踪RNA运输 Exo-Green标记exosome（2小时后）：追踪蛋白运输
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√ 运输与保存
Exo-Glow试剂盒组分置于棕色避光管中干冰运输，保存于-20℃。避免反复冻融。产品收到后4℃保存。有效期自收到产品后至少1年。
